l’accoppiamento covalente di due o più enzimi è considerato strategico per aumentare l’efficienza delle reazioni enzimatiche a più fasi, denominate anche ?reazioni a cascata?. Ciò è permette l?espansione e il miglioramento del loro impiego nelle produzioni industriali o nei sistemi diagnostici, in particolare per la rilevazione di glicosidi di cui non si dispone ancora di saggi diretti. Il miglioramento dei sistemi d?immobilizzazione e di accoppiamento covalente degli enzimi è un importante obiettivo nella moderna biotecnologia. Nuovi sistemi d?immobilizzazione in vivo di proteine che fanno uso di particolari protein-tag (ASLtag; Merlo et al., JEIMC, 34: 490-499) sono stati prodotti nel laboratorio del Dr. Perugino. I geni codificanti le ASLtag saranno fusi a quelli di vari enzimi glicosidasi e glicosil-trasferasi d?interesse biotecnologico (forniti dal Prof. Withers). La loro espressione in Escherichia coli porta all?esposizione (immobilizzazione in vivo) dei suddetti enzimi sulla membrana esterna del batterio, grazie alle proprietà delle ASLtag. In seguito, presso i laboratori dell?UBC Science, le proteine di fusione in E.coli saranno legate covalentemente, attraverso l?utilizzo di linker bifunzionali (prodotti dal Dr. Minassi dell?Università Piemonte Orientale di Novara). Gli enzimi accoppiati e immobilizzati ottenuti saranno confrontati ai relativi enzimi liberi nella loro capacità di funzionare nelle reazioni a cascata, così come sarà valutata la loro stabilità nel tempo e in varie condizioni di reazione.Il principale vantaggio di questa nuova metodologia risiede nel fatto che non richiede la purificazione dei bio-catalizzatori, il loro accoppiamento e la loro finale immobilizzazione.
Deadline 2019/2020
Category STM 2019
Institute IBBR – Institute of Biosciences and Bioresources
Contact person Giuseppe Perugino giuseppe.perugino@ibbr.cnr.it
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